ઉત્પાદનો

5-ફ્લોરોરાસિલ (5-FU) અને બે અંતર્જાત મોનોફોસ્ફેટ ન્યુક્લિયોટાઇડ્સના કેટલાક ચયાપચયની ચોક્કસ માત્રા નક્કી કરવા માટે, અમે લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી-ટેન્ડમ માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રી (LC-MS/MS) પર આધારિત મૂળ પદ્ધતિ વિકસાવી છે.આ પરીક્ષાએ આના નિર્ધારણને મંજૂરી આપી: (i) 5-FU અથવા 5-ફ્લોરો-2′-deoxyuridine (5-FdUrd) માંથી 5-ફ્લોરો-2′-ડીઓક્સ્યુરિડિન-5′-મોનોફોસ્ફેટ (5-FdUMP) નું અંતઃકોશિક ઉત્પાદન. , (ii) અંતઃકોશિક 2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (dUMP)/thymidine-5′-monophosphate (TMP) ગુણોત્તર પર 5-FdUMP સાંદ્રતાની અસર, અને (iii) 5-FdUMP ની સ્ત્રાવ હદ અને ABC ટ્રાન્સપોર્ટર્સ દ્વારા માનવ સંસ્કારી કોષોમાંથી 5-FU.અમારી પ્રાયોગિક પરિસ્થિતિઓ હેઠળ, કોષોને 5-FU અથવા 5-FUrd સાથે ઉકાળવામાં આવ્યા હતા.પછી, સેલ્યુલર પ્રોટીન મિથેનોલ દ્વારા અવક્ષેપિત કરવામાં આવ્યા હતા.આ પ્રક્રિયા ઉચ્ચ નિષ્કર્ષણ પુનઃપ્રાપ્તિ પ્રદાન કરે છે.વધુમાં, કોષોમાંથી 5-FU અને 5-FdUMP સ્ત્રાવને માપવા માટે, અમે સંસ્કૃતિ માધ્યમમાં આ પરમાણુઓનું પ્રમાણીકરણ હાથ ધર્યું.મીડિયાને કાં તો સીધું ઇન્જેક્ટ કરવામાં આવ્યું હતું (5-FU) અથવા ઓએસિસ વેક્સ એક્સટ્રેક્શન કારતૂસ (5-FdUMP) નો ઉપયોગ કરીને નક્કર તબક્કાના નિષ્કર્ષણ હેઠળ ગયા હતા.મોબાઇલ તબક્કા તરીકે એમોનિયમ ફોર્મેટ બફર/મિથેનોલ/વોટર (5/5/90, v/v) નો ઉપયોગ કરીને આઇસોક્રેટિક મોડ સાથે dC18 એટલાન્ટિસ 3.5 μm, (100 mm × 2.1 mm id) કૉલમ પર વિશ્લેષણનું વિભાજન કરવામાં આવ્યું હતું.રનનો સમય 6.2 મિનિટથી વધુ ન હતો.વિશ્લેષકો નકારાત્મક આયન મોડ હેઠળ ઇલેક્ટ્રોસ્પ્રે ઇન્ટરફેસમાં આયનાઇઝ્ડ હતા.અમે સંયોજનો અનુસાર 2.5–150 ng mL −1 ની શ્રેણીમાં પદ્ધતિને માન્ય કરી.ઇન્ટ્રા- અને ઇન્ટર-એસે વેરિએબિલિટી સાત દિવસમાં 10% કરતાં ઓછી હતી.બધા સંયોજનો કોષોમાં અથવા સંસ્કૃતિ માધ્યમમાં સ્થિર હતા જ્યારે નમૂનાઓ ઓછામાં ઓછા બે અઠવાડિયા માટે −20 °C પર સંગ્રહિત કરવામાં આવ્યા હતા, અને ત્રણ ફ્રીઝ-થૉ ચક્ર પછી.બંને માધ્યમોમાં કોઈ મેટ્રિક્સ અસર જોવા મળી નથી.