ઉત્પાદનો

કોલીસીન E1 ચેનલ ડોમેનની મેમ્બ્રેન ટોપોલોજીનો અભ્યાસ ફ્લોરોસેન્સ રેઝોનન્સ એનર્જી ટ્રાન્સફર (FRET) દ્વારા કરવામાં આવ્યો હતો.FRET માં દાતા તરીકે આનુવંશિક રીતે એન્કોડેડ ફ્લોરોસન્ટ એમિનો એસિડ (કૌમરિન) અને FRET સ્વીકારનાર તરીકે DABMI (4-(dimethylamino) phenylazophenyl-4'-maleimide) સાથે ચુસ્તપણે લેબલ થયેલ સિસ્ટીન અવશેષો સામેલ હતા.ફ્લોરોસન્ટ કૌમરિન અવશેષો ઓર્થોગોનલ tRNA/aminoacyl-tRNA સિન્થેટેઝ જોડી દ્વારા પ્રોટીનમાં સમાવિષ્ટ કરવામાં આવ્યા હતા જેણે કોલિસિન ચેનલ ડોમેનની અંદર કોઈપણ સાઇટમાં પસંદગીયુક્ત સમાવિષ્ટ કરવાની મંજૂરી આપી હતી.દરેક વેરિઅન્ટમાં ક્યુમરિન ઇન્કોર્પોરેશન માટે સ્ટોપ (TAG) મ્યુટેશન અને DABMI એટેચમેન્ટ માટે સિસ્ટીન (TGT) મ્યુટેશન છે.દ્રાવ્ય અને પટલ-બાઉન્ડ બંને સ્થિતિઓ માટે FRET વિશ્લેષણનો ઉપયોગ કરીને હેલિકોસ 1-6 ની અંદર છ આંતરહેલીકલ અંતર નક્કી કરવામાં આવ્યા હતા.FRET ડેટાએ મેમ્બ્રેન એસોસિએશન પર હેલીસીસ 3-6 વચ્ચેના આંતરહેલીકલ અંતરમાં મોટા ફેરફારો દર્શાવ્યા છે જે ચેનલ ડોમેનની પટલ-બાઉન્ડ માળખામાં નવી સમજ આપે છે.સામાન્ય રીતે, coumarin-DABMI FRET ઇન્ટરહેલિકલ કાર્યક્ષમતા મેમ્બ્રેન બાઈન્ડિંગ પર ઘટે છે, જે કોલીસીન ચેનલ માટે છત્ર મોડેલ પર નિર્માણ કરે છે.વર્તમાન અને અગાઉ પ્રકાશિત થયેલ FRET ડેટાના આધારે ચેનલ ડોમેનની બંધ સ્થિતિ માટેનું કામચલાઉ મોડલ વિકસાવવામાં આવ્યું હતું.મૉડલ હેલિકોસ 1-7 ની બાહ્યકોષીય બાજુથી ઘડિયાળની દિશામાં ગોળાકાર ગોઠવણીનું સૂચન કરે છે અને હેલિકોસ 1, 6, 7, અને 10 નું પટલ ઇન્ટરફેસિયલ એસોસિએશન હેલીસિસ 8 અને 9 દ્વારા રચાયેલી કેન્દ્રીય ટ્રાન્સમેમ્બ્રેન હેરપિન આસપાસ છે.