ઉત્પાદનો

યુકેરીયોટિક કોષોમાં ચાર ડીઓક્સીરીબોન્યુક્લિયોસાઇડ ટ્રાઇફોસ્ફેટ્સ (ડીએનટીપી) ની મિનિટની માત્રાનું નાજુક સંતુલન હોય છે, જે માત્ર થોડી મિનિટોની ડીએનએ પ્રતિકૃતિ માટે પૂરતું હોય છે.એક જ ડીએનટીપીની ઉણપ અને સરપ્લસ બંને પરિવર્તન દરમાં વધારો, ખામીયુક્ત ડીએનએ રિપેર અથવા મિટોકોન્ડ્રીયલ ડીએનએ અવક્ષયમાં પરિણમી શકે છે.dNTP ને સામાન્ય રીતે એન્ઝાઈમેટિક એસે દ્વારા માપવામાં આવે છે જેમાં ડીએનએ પોલિમરેઝ દ્વારા ચોક્કસ સિન્થેટિક ઓલિગોન્યુક્લિયોટાઈડ્સમાં કિરણોત્સર્ગી dATP (અથવા dATP માટે કિરણોત્સર્ગી dTTP) નો સમાવેશ અજાણ્યા dNTP ની સાંદ્રતાના પ્રમાણસર હોય છે.અમે શોધી કાઢ્યું છે કે સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતું ક્લેનોવ ડીએનએ પોલિમરેઝ અજ્ઞાત dNTP માટે અનુરૂપ રિબોન્યુક્લિયોટાઇડને બદલી શકે છે જે કેટલાક કિસ્સાઓમાં dNTPs ના મોટા અતિરેક તરફ દોરી જાય છે.અમે હવે દરેક dNTP માટે એસે શરતોનું વર્ણન કરીએ છીએ જે રિબોન્યુક્લિયોટાઇડ ઇન્કોર્પોરેશનને ટાળે છે.ડીટીટીપી અને ડીએટીપી પરીક્ષણો માટે તે ક્લેનોઉ એન્ઝાઇમ અને લેબલવાળા ડીએટીપી (અથવા ડીટીટીપી) ની સાંદ્રતાને ઘટાડવા માટે પૂરતું છે;dCTP અને dGTP માટે અમારે t he Klenow એન્ઝાઇમને ક્યાં તો Taq DNA પોલિમરેઝ અથવા થર્મો સિક્વેનેઝ સાથે બદલવું પડ્યું.અમે સૂચવીએ છીએ કે અગાઉના કેટલાક અહેવાલોમાં રિબોન્યુક્લિયોટાઇડના સમાવેશને કારણે dGTP અને dCTP માટે ખૂબ ઊંચા મૂલ્યો થઈ શકે છે.