ઉત્પાદનો

એન્થ્રાનિલિક એસિડ અને ફ્લોરોસેન્સ ડિટેક્શન સાથે ડેરિવેટાઇઝેશન પર આધારિત ગ્લાયકોસિલટ્રાન્સફેરેસ માટે નવી ઉચ્ચ-પ્રદર્શન પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફી એસે.

ઉચ્ચ-પ્રદર્શન પ્રવાહી દ્વારા β1-4 ગેલેક્ટોસિલટ્રાન્સફેરેઝ (GalT-1) અને α2-6 sialyltransferase (ST-6) બંનેની પ્રવૃત્તિઓને માપવા માટે 2-aminobenzoic એસિડ (2AA; એન્થ્રાનિલિક એસિડ, AA) ના અનન્ય લેબલિંગ રસાયણશાસ્ત્રનો ઉપયોગ કરીને પરીક્ષણો વિકસાવવામાં આવ્યા હતા. ફ્લોરોસેન્સ ડિટેક્શન સાથે ક્રોમેટોગ્રાફી (એચપીએલસી) (અનુમુલા કેઆર. 2006. ગ્લાયકોપ્રોટીન કાર્બોહાઇડ્રેટ્સના ઉચ્ચ-પ્રદર્શન પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફિક વિશ્લેષણ માટે ફ્લોરોસેન્સ ડેરિવેટાઇઝેશન પદ્ધતિઓમાં એડવાન્સિસ. એનલ બાયોકેમ. 350:1-23).N-Acetylglucosamine (GlcNAc) અને N-acetyllactosamine નો અનુક્રમે GalT-1 અને ST-6 માટે દાતા તરીકે સ્વીકૃત તરીકે અને uridine diphosphate (UDP)-galactose અને cytidine monophosphate (CMP)-N-acetylneuraminic એસિડ (NANA) તરીકે ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો.એન્ઝાઇમેટિક ઉત્પાદનોને AA સાથે સીટુમાં લેબલ કરવામાં આવ્યા હતા અને સામાન્ય-તબક્કાની પરિસ્થિતિઓનો ઉપયોગ કરીને TSKgel Amide 80 કૉલમ પરના સબસ્ટ્રેટથી અલગ કરવામાં આવ્યા હતા.ઉત્સેચક એકમો એકસાથે વ્યુત્પન્ન ધોરણો Gal-β1-4GlcNAc અને NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc સાથે સરખામણી કરીને ટોચના વિસ્તારોમાંથી નક્કી કરવામાં આવ્યા હતા.રેખીયતા (સમય અને એન્ઝાઇમ એકાગ્રતા), ચોકસાઇ (ઇન્ટ્રા- અને ઇન્ટરસે) અને એસે માટે પ્રજનનક્ષમતા સ્થાપિત કરવામાં આવી હતી.અલગતા અને શુદ્ધિકરણ દરમિયાન એન્ઝાઇમની ગતિવિધિઓ પર દેખરેખ રાખવામાં એસેઝ ઉપયોગી હોવાનું જણાયું હતું.આ પરીક્ષણો અત્યંત સંવેદનશીલ હતા અને પરંપરાગત કિરણોત્સર્ગી ખાંડ-આધારિત માપન કરતાં સમાન અથવા વધુ સારી કામગીરી બજાવી હતી.એસે ફોર્મેટનો ઉપયોગ અન્ય ટ્રાન્સફરસેસની પ્રવૃત્તિને માપવા માટે પણ થઈ શકે છે, જો કે કાર્બોહાઇડ્રેટ સ્વીકારનારાઓ લેબલિંગ માટે ઘટાડાનો અંત ધરાવે છે.IgG નો ઉપયોગ કરીને ગ્લાયકોપ્રોટીન સ્વીકારનારાઓ માટે એક પરીક્ષા વિકસાવવામાં આવી હતી.IgG ગ્લાયકેન્સ (બાયન્ટેનરી G0, G1, G2, mono- અને disialylated) ના વિભાજન માટે ટૂંકી HPLC પ્રોફાઇલિંગ પદ્ધતિ વિકસાવવામાં આવી હતી, જેણે GalT-1 અને ST-6 પ્રવૃત્તિઓને ઝડપી રીતે નિર્ધારિત કરવાની સુવિધા આપી હતી.વધુમાં, આ પ્રોફાઇલિંગ પદ્ધતિ ક્લિનિકલ સેટિંગ્સમાં IgG ગ્લાયકેન્સમાં ફેરફારોનું નિરીક્ષણ કરવા માટે ઉપયોગી સાબિત થવી જોઈએ.