ઉત્પાદનો

અમારા અગાઉના અભ્યાસોએ KSHV ચેપના પ્રારંભિક અને અંતમાં બંને તબક્કામાં તેની નિર્ણાયક ભૂમિકાઓ જાહેર કરી છે.આ અભ્યાસમાં, અમે મોનોક્લોનલ એન્ટિબોડીઝની પેનલનો ઉપયોગ કરીને ORF45 ના ઇન્ટરેક્ટોમનું સર્વેક્ષણ કર્યું.અગાઉ ઓળખાયેલ એક્સ્ટ્રા સેલ્યુલર રેગ્યુલેટેડ કિનેઝ (ERK) અને p90 રિબોસોમલ S6 કિનેઝ (RSK) પ્રોટીન ઉપરાંત, અમને ∼38 kDa અને ∼ 130 kDa સહિત અન્ય ઘણા કોપ્યુરિફાઈડ પ્રોટીન મળ્યાં છે.માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રીએ જાહેર કર્યું કે 38-kDa પ્રોટીન વાયરલ ORF33 છે અને 130-kDa પ્રોટીન સેલ્યુલર USP7 (યુબીક્વિટિન-વિશિષ્ટ પ્રોટીઝ 7) છે.અમે ORF33-બંધનકર્તા ડોમેનને ORF45 ના અત્યંત સંરક્ષિત કાર્બોક્સિલ-ટર્મિનલ 19 એમિનો એસિડ્સ (AA) સાથે અને USP7-બંધનકર્તા ડોમેનને ORF45 ના મધ્ય પ્રદેશમાં જાણ કરાયેલ સર્વસંમતિ મોટિફ સાથે મેપ કર્યું છે.ઇમ્યુનોફ્લોરેસેન્સ સ્ટેનિંગનો ઉપયોગ કરીને, અમે ORF33 અથવા USP7 સાથે ORF45 નું સ્થાનિકીકરણ બંને ટ્રાન્સફેક્ટેડ સ્થિતિમાં અને KSHV- સંક્રમિત કોષોમાં અવલોકન કર્યું.તદુપરાંત, અમે ORF33/USP7 ના ન્યુક્લિયસથી સાયટોપ્લાઝમમાં ORF45-આશ્રિત પુનઃસ્થાપન નોંધ્યું છે.અમને જાણવા મળ્યું કે ORF45 ને કારણે ORF33 પ્રોટીન સંચયમાં વધારો થયો હતો જે નાબૂદ કરવામાં આવ્યો હતો જો ORF45 માં ORF33- અથવા USP7-બંધનકર્તા ડોમેન કાઢી નાખવામાં આવ્યું હોય.વધુમાં, KSHV જિનોમમાં ORF45 ના સંરક્ષિત કાર્બોક્સિલ ટર્મિનસને કાઢી નાખવાથી KSHV- સંક્રમિત કોષોમાં ORF33 પ્રોટીનનું સ્તર તીવ્રપણે ઘટ્યું અને પ્રોજેની વિરિયન્સનું ઉત્પાદન નાબૂદ થયું.સામૂહિક રીતે, અમારા પરિણામો માત્ર ORF45 ઇન્ટરેક્ટોમના નવા ઘટકોને જ પ્રગટ કરતા નથી, પણ તે પણ દર્શાવે છે કે આ પ્રોટીન વચ્ચેની ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ KSHV lytic પ્રતિકૃતિ માટે નિર્ણાયક છે. Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV) એ કેટલાય માનવ કેન્સરનું કારક એજન્ટ છે.KSHV ORF45 એ મલ્ટિફંક્શનલ પ્રોટીન છે જે KSHV lytic પ્રતિકૃતિ માટે જરૂરી છે, પરંતુ ચોક્કસ મિકેનિઝમ્સ કે જેના દ્વારા ORF45 તેના નિર્ણાયક કાર્યો કરે છે તે અસ્પષ્ટ છે.અમારા અગાઉના અભ્યાસો દર્શાવે છે કે કોષોમાં તમામ ORF45 પ્રોટીન ઉચ્ચ-મોલેક્યુલર-વજન સંકુલમાં અસ્તિત્વ ધરાવે છે.તેથી અમે લિટિક પ્રતિકૃતિ દરમિયાન તેની ભૂમિકાઓમાં આંતરદૃષ્ટિ પ્રદાન કરવા માટે ORF45 ના ઇન્ટરેક્ટોમને લાક્ષણિકતા આપવાનો પ્રયાસ કર્યો.મોનોક્લોનલ એન્ટિબોડીઝની પેનલનો ઉપયોગ કરીને, અમે KSHV-સંક્રમિત કોષોમાં ORF45 ઇન્ટરેક્ટોમનું સર્વેક્ષણ કર્યું.અમે ORF45 ના બે નવા બંધનકર્તા ભાગીદારોને ઓળખ્યા: વાયરલ પ્રોટીન ORF33 અને સેલ્યુલર ubiquitin-વિશિષ્ટ પ્રોટીઝ 7 (USP7).અમે વધુ દર્શાવીએ છીએ કે ORF45 અને ORF33 વચ્ચેની ક્રિયાપ્રતિક્રિયા KSHV વાયરલ કણોના કાર્યક્ષમ ઉત્પાદન માટે નિર્ણાયક છે, જે સૂચવે છે કે આ ક્રિયાપ્રતિક્રિયા સાથે લક્ષિત હસ્તક્ષેપ KSHV lytic પ્રતિકૃતિને અટકાવવા માટે નવી વ્યૂહરચનાનું પ્રતિનિધિત્વ કરી શકે છે.